Примечание: *-достоверность различий показателей по отношению к неактивированным нейтрофилам, **-достоверность различий показателей по отношению к НГ, облучённых лазером с постоянной генерацией импульса, ***- достоверность различий показателей по отношению к НГ, облучённых лазером с переменной генерацией импульса С учетом поправки Бонферрони критический уровень р составил 0,003. U-критерий Мана- Уитни.
Анализ цитокинового состава показал достоверно более высокое содержание провоспалительных цитокинов ИЛ-1α, ИЛ-1β, РАИЛ1, ИЛ-8, ФНО-α в супернатантах нейтрофилов крови доноров, облучённых лазером с переменной генерацией импульса (таблица 4). Возможно, данный вид излучений является стимулирующим фактором, приводящим к достоверно, по сравнению с неактивированными и активированными НИЛИ с постоянной генерацией импульса НГ доноров более выраженной секреции преформированных цитокинов. Помимо этого, в секреторных продуктах нейтрофилов были обнаружены высокомолекулярные пептиды, обладающие иммунотропной активностью-дефенсины и бактерицидный/индуцированный протеин BPI (таблица 5).
Таблица 5
Содержание дефенсинов и белка BPI в супернатантах нейтрофилов неактивированных и активированных лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса (М±m)
Пептидные продукты нейтрофилов
Супернатанты
неактивированных
нейтрофилов
Параметры излучения
активированные
ЛО с постоянной
генерацией
импульса
активированных
ЛО с переменной
Дефенсины, пг/мл
4.47±0.95
4.78±0.59
*, ***
6.47±0.45
*,**
BPI, пг/мл
0.67±0.20
0.75±0.22
0.99±0.33
Результаты исследования биохимического состава секреторных продуктов неактивированных и стимулированных лазерным излучением нейтрофилов показали следующее (таблица 6). Продукты метаболизма оксида азота (NO) присутствовали как в супернатантах нейтрофилов интактных, так активированных ЛО НГ. Содержание метаболитов азота в супернатантах облучённых лазером нейтрофилов увеличилось в 3,7 раза по сравнению с содержанием продуктов метаболизма оксида азота с супернатантах интактных НГ. Более чем на 50% увеличилось содержание нитратов и нитритов в секреторных продуктах нейтрофилов, облучённых лазером низкой интенсивности.
Таблица 6
Биохимический состав в супернатантах нейтрофилов неактивированных и активированных лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса
Компоненты
генерацией импульса
Нитраты, мкмоль/л
15.21±3.43
31.11±7,23
39.19±7,26
Нитриты, мкмоль/л
43.1±5.17
82.38±22,83
99.38±22.11
Общее содержание метаболитов оксида азота, мкмоль/л
28.31±8.35
137.91±35,24
166.9±34.29
Са2+ моль/л
0.22±0.01
0.52±0.02
0.70±0.04
Мg, 2+ моль/л
0.98±0.02
0.58±0,04
0.48±0.03
Общее содержание глюкозы мкмоль/л
4.95±0,05
3.25±0.05
2.01±0.02
Возможно, повышение содержания NO при воздействии НИЛИ происходит за счёт усиления окислительно-восстановительных процессов, в том числе ускорения реакции окисления аргинина ферментом NO-синтазой, результатом которой и является образование оксида азота (Артюхов В.Г., 2005). Выделяющийся в межклеточное пространство NO является реакционно-способным соединением с широким спектром биологического, в том числе, бактерицидного действия (Захарова М.А., 2003).
При изучении содержания глюкозы в супернатантах неактивированных и активированных нейтрофилов доноров было отмечено, что в ответ на стимуляцию гранулоцитов лазером низкой интенсивности уровень глюкозы достоверно снижается (р<0,003, р=0,00023) с 4,95 до 2,01 мкмоль/л, возможно, такой расход глюкозы, являющейся ключевым метаболитом биохимических процессов возможен вследствие повышения энергетических затрат клетки при её стимуляции лазерным излучением (Бережная Н.М., 1998; Маянский А.Н. и соавт., 1989).
Активация нейтрофилов лазером низкой интенсивности с постоянной генерацией импульса выявила рост уровня секреции ионов Са2+, в супернатантах нейтрофилов более чем в 3 раза по сравнению с неактивированными нейтрофилами доноров. Возможной причиной увеличения концентрации ионов Са2+, после стимуляции НГ лазерным излучением является быстрый выход из органел- кальциосом в цитозоль большого количества ионов Са2+, в результате чего мы наблюдаем рост в супернатантах ионов кальция (Glossman H., 1999). Зарегистрированное снижение концентрации ионов Мg2+ возможно, происходят в результате его расходования на процессы активации процессов метаболизма, а именно катаболизма в клетке (Эллиот В., 2000). Сравнительный анализ биохимического, цитокинового состава супернатантов нейтрофилов облучённых лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса показал, что, несмотря на различный количественный состав секреторных продуктов, полученных в результате активации клетки лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса, данные изменения имели однонаправленный характер.
Наиболее значимые изменения показателей зарегистрированы при воздействии лазером с переменной генерацией импульса. Полученные нами данные о составе супернатантов нестимулированных и стимулированных нейтрофилов, в целом, совпадают с результатами исследования А.В. Чукичева (1996), И.Е.Третьяковой (2003). Зарегистрированное нами усиление функциональных возможностей нейтрофилов и продуктов их секреции с учётом биоэффективных доз воздействия лазерным излучением низкой интенсивности послужило основанием для проведения объективного исследования иммунотропных эффектов воздействий лазерного излучения низкой интенсивности в практике.
Этап исследования иммунотропных эффектов лазеров низкой интенсивности in vivo
На современном этапе возможны 2 пути реализации эффектов действия лазеров низкой интенсивности: эффекты, обусловленные их локальным и системным применением в терапевтических целях. Исходя из возможностей применения лазеров красного спектра излучения в терапевтической практике, представляло огромный интерес изучение их возможностей для устранения иммунологических дисфункций. В связи с вышеизложенными обстоятельствами, следующим этапом наших исследований стало изучение влияния лазерного излучения на клеточные и гуморальные факторы системного иммунитета, состояние нитроксидергической системы, липидного профиля периферической крови при проведении внутрисосудистого лазерного облучения крови (ВЛОК) у женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта.
У пациенток с воспалительными заболеваниями нижнего отдела репродуктивного тракта, вызванными хламидиями были выявлены сдвиги во всех изучаемых звеньях иммунной системы, характерные для хронического воспалительного процесса: лейкоцитоз, нейтрофилия с уменьшением абсолютного количества нейтрофилов, лимфоцитоз с изменением субпопуляционного состава, выраженном в снижении процента лейкоцитов, несущих CD3, СD 4, СD 16; СD 20 рецепторы, повышении CD8+лимфоцитов, снижения СD 95+клеток, иммнорегуляторного индекса (СD 4+/CD8+), активности нейтрофилов по НСТ-тесту угнетения фагоцитарной функции и функционального резерва нейтрофилов, усилении лизосомальной активности, повышении концентрации Ig A, Ig М, Ig G в сыворотке крови, снижения уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), содержания С1-С3 компонентов комплемента, СН 50, уровня ИЛ-1α, ИЛ-1β, ФНО-α, ИФН-γ, дефенсинов, бактерицидного протеина BPI, при повышении концентрации ИЛ-8. В соответствии с рекомендациями лечению урогенитального хламидиоза внутрисосудистое лазерное облучение крови (ВЛОК) может быть использовано в комплексе лечебных мероприятий.
Нами проведена оценка эффективности использования ВЛОК для коррекции выявленных иммунологических дисфункций. Исследование иммунологических показателей крови проведено до начала терапии и на следующий день после её завершения базисной терапии. Контрольную группу составили здоровые женщины без хламидийной инфекции нижнего отдела репродуктивного тракта (таблица 7).
Таблица 7
Иммунологические показатели периферической крови у женщин с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта до и после терапии с применением ВЛОК
Показатели
Здоровые
женщины
До
лечения
Женщины с хламидийной инфекцией нижнего отдела репродуктивного тракта
Базисная
терапия
терапия+ ВЛОК
Количество лейкоцитов,×109/ л
5.59 ± 0.10
9.01 ± 0.30
*
8.91 ± 0,22
*,****
6.01 ± 0.12
*,***
Количество лимфоцитов,%
29.21 ± 1.02
35.61 ± 1,10
38.51 ± 1,02
39.51 ± 1,07
**,***
Количество лимфоцитов,×109/л
1.94 ± 0,12
2,13 ± 0,16
2.19 ± 0,12
1.98 ± 0,12
Количество нейтрофилов,%
68.90 ± 1,13
52.90 ± 1.11
61.90 ± 1.12
69.90 ± 1.09
Количество нейтрофилов,×109/л
3.78 ± 0,25
2,26 ± 0,15
3.44 ± 0.25
3.84 ± 0,25
Лизосомальная активность нейтрофилов, %
91.55 ± 1,12
97.52 ± 1.10
95.52 ± 1.16
92.50 ± 1.14
Лизосомальная активность нейтрофилов, у.е.
324.0 ±15,01
349.05 ±19,10
371.10 ±16,03
*,**,****
321.09 ± 15,01
НСТ–тест спонтанный, %
46.91 ± 1.72
37.9 ± 1.94
42.9 ± 1.23
47.91± 1.72
НСТ–тест спонтанный, у.е.
0.58 ± 0.05
0.50 ± 0,03
0.54 ± 0,02
0.59 ± 0.05
НСТ–тест активированный, %
57.44 ± 1.23
50.41 ± 1.77
53.41 ± 1,75
58.44 ± 1.22
НСТ–тест активированный, у.е.
0.83 ± 0.04
0.68 ± 0.03
0.78 ± 0.02
0.88 ± 0.04
ФРН
1.94± 0.46
1.70 ± 0,41
1.86 ± 0,42
1.98± 0.46
Активность фагоцитоза нейтрофилов, %
46.51 ± 1.24
35.51 ± 1.22
42,51 ± 1,26
47.51 ± 1,20
Интенсивность фагоцитоза нейтрофилов, у.е.
1.72± 0,06
1.52 ± 0,08
1.62 ± 0,07
1.84± 0,06
СD3, %
27.92 ± 1,94
18.12 ± 1.94
24.12 ± 1.94
28.12 ± 1.94
СD3, абс.
0.50 ± 0,08
0.45 ± 0.08
0,42 ± 0,01
0,53 ± 0.08
СD4, %
30.81 ± 1,22
21.89 ± 1.73
29,19 ± 1,13
31,81 ± 1.22
СD4, абс.
0.45 ± 0,02
0.37 ± 0,06
0.43 ± 0,06
0,47 ± 0,02
СD8, %
21.14 ± 1,16
24.14 ± 1,23
21.14 ± 1,20
22,14 ± 1,16
СD8, абс.
0.41 ± 0,02
0,44 ± 0,05
0.42 ± 0,01
0,41 ± 0,02
СD4/СD8
1,95 ± 0,06
0.97 ± 0,06
1.19 ± 0,08
1,97 ± 0,06
СD16, %
13.68 ± 0,27
12.03 ± 0,70
13.63 ± 0,17
13,88 ± 0,27
СD16, абс.
0.21 ± 0,05
0,22 ± 0,03
0.24 ± 0,01
0,23 ± 0,05
СD20, %
13,86 ± 0,88
10.61 ± 0,79
11,81 ± 0,99
13.92 ± 0.88
СD20, абс.
0.22 ± 0,03
0,19 ± 0,03
0,21 ± 0,23
0.22 ± 0.03
СD95, %
21.69 ± 1,98
14,69 ± 2,10
17.69 ± 2,16
22,69 ± 1.98
СD95, абс.
0.34 ± 0,06
0,28 ± 0,06
0.33 ± 0,06
0.35 ± 0.06
С1, эф.мол /мл
99.93±6.01
91.2±8.01
90.2±7.01
100.21±6.06
С2, эф.мол /мл
84.40±4.46
83.99±4.53
83.21±4.50
84.42±4.42
С3, эф.мол /мл
96.81±3.12
88.8±3.62
82.11±2.41
96.8±3.12
С4, эф.мол /мл
80.21±3.34
78.2±3.81
72.22±3.54
80.2±3.34
С5, эф.мол /мл
88.52±4.25
87.5±3.11
86.52±2.6
88.5±4.25
СН-50, у.е.
63.22±6.15
69.22±6.62
56.22±7.61
63±6.15
ЦИК
69.44±9.46
39±8.44
49.13±8.03
69±9.46
Ig А, г/л
2.32 ± 0,12
2.80 ± 0,09
2.49 ± 0.10
2,92 ± 0,12
Ig М, г/л
1.19 ± 0.14
1.23 ± 0,08
1.10 ± 0.11
1,19 ± 0.14
Ig G, г/л
9.16 ± 0.29
9.51 ± 0,38
9.36 ± 0.25
9,16 ± 0.29
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9