Примечание: *-достоверность различий показателей по отношению к неактивированным нейтрофилам, **-достоверность различий показателей разных групп, использован критерий Мана-Уитни
Таблица 2
Сравнительный анализ дозозависимого влияния НИЛИ с постоянной генерацией импульса при длине волны 0,63 мкм, экспозиции 12,5 мин. на функциональную активность нейтрофилов периферической крови доноров(М±m)
Показатели
Дозы облучения в Дж/см2
0,018
0,036
0,072
0,14
0,28
0,56
1,1
Показатель люминесценции лизосом,у.е
300.19±12.12*
259.19±10.14*,**
249.19±12.22*,**
230.19±10.21*,**
229.19±11.16*,**
201.19±11.04*,**
181.19±13.02
*,**
Активность лизосом, %
90.08±1.02*
79.08±1.03*,**
72.08±1.01*,**
69.08±1.03*,**
63.05±1.03*,**
56.08±1.04*,**
48.05±1.03
НСТ- спонтанная, %
35.59±1.25*
42.59±1.22*,**
44.59±1.20*,**
54.59±1.22*,**
64.59±1.23*,**
88.59±1.19*,**
98.59±1.20
НСТ- спонтанная, у.е
0.39±0.01*
0.47±0.03*,**
0.58±0.03*,**
0.62±0.04*,**
0.69±0.03*,**
0.76±0.04*,**
0.89±0.01
НСТ-индуцированная,
%
58.13±1.41*
69.13±1.44*,**
79.13±1.41*,**
82.13±1.42*,**
89.13±1.43*,**
95.13±1.44*,**
99.13±1.41
НСТ-индуцированная, у.е
0.67±0.03*
0.79±0.01*,**
0.88±0.02*,**
0.91±0.02*,**
0.94±0.03*,**
0.96±0.01*,**
0.98±0.03
Функциональный резерв нейтрофилов
2.27±0.11*
1.65±0.10*,**
1.79±0.11*,**
1.79±0.13*,**
1.41±0.12*,**
1.10±0.14*,**
1.02±0.11
Активность фагоцитоза,%
54.85±1.21*
66.85±1.20*,**
72.85±1.21*,**
80.85±1.23*,**
86.85±1.20*,**
95.85±1.24*,**
98.85±1.22
Интенсивность фагоцитоза
1.78±0.09*
2.1±0.09*,**
2.31±0.09*,**
2.51±0.09*,**
2.55±0.09*,**
2.65±0.09*,**
2.75±0.09
Исследование in vitro различных параметров ЛО с постоянной генерацией импульса позволил выявить оптимальную дозу, при которой зарегистрировано максимальное усиление функциональной активность НГ. Такими параметрами являются доза излучения 1,1 Дж/см2, время экспозиции 12,5мин (20-кратное увеличение времени экспозиции от первоначального) (таблица2).
Анализ полученных результатов показал, что при импульсном режиме излучения доза, необходимая для максимальной активации клетки (0,056Дж\см2) ниже значений, позволяющей достичь аналогичного эффекта при ЛО с постоянной генерацией импульса (1,1Дж\см2). Тем не менее, изменения функциональной активности клеток имели одинаковую динамику, направленную в сторону усиления активности нейтрофила, независимо от режима следования импульса. Результаты наших исследований коррелируют с мнением И.И. Горяйнова (Горяйнов И.И.,1998), о том, что действие кванта света на разных режимах излучения имеет сходное биостимулирующее действие на клетку, т. е истинная природа фотоакцепторов квантов света оказывается не имеющей решающего значения, ибо их количество и многообразие вполне может уравнивать (усреднять) вторичные эффекты лазерных воздействий.
Наиболее значительные изменения зарегистрированы нами при анализе влияния НИЛИ с переменной и постоянной генерацией импульса на процессы внутриклеточной бактерицидности НГ. Можно предположить, что это данный процесс связан со стимуляцией лазерным излучением активности, локализованных в гранулах цитоплазмы НГ ферментов гексозомонофосфатного шунта, в частности НАДФ•H-оксидазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, отвечающей за редукцию НСТ (Маянский А.Н., 2006).
Для изучения правильности нашего предположения проведено измерение активности фермента НАДФ•Н-оксидазы, которой принадлежит ключевая роль в развитии респираторного взрыва, поскольку данный фермент осуществляет транспорт электронов от НАДФ цитозоля к молекулярному кислороду, а НИЛИ может являться физическим стимулятором выработки данного фермента (таблица 3).
Результаты исследований подтверждают наше предположение о том, что НИЛИ стимулирует выработку локализованных в гранулах цитоплазмы нейтрофилов фермента - НАДФ•Н оксидазы, поскольку нами зарегистрировано достоверное усиление выработки данного фермента более выраженное при облучении взвеси НГ с лазером с переменной генерацией импульса при дозе излучения 0,56 Дж/см2
Таблица 3
Влияние лазерного излучения с постоянной и переменной генерацией импульса на выработку НАДФН-оксидазы нейтрофилами, выделенными из крови доноров (М±m)
Доза лазерного
излучения
Дж\см2
Скорость НАДФН-оксидазной реакции пмоль/мин х106клеток
Неактивированные
нейтрофилы
Нейтрофилы, активированные ЛО с постоянной
генерацией
импульса
Нейтрофилы, активированные ЛО с переменной генерацией
1.03±0.16
1.93±0.18
*,***
2.13±0.12
1.80±0.11
2.81±0.11
3.08±0.21
2.72±0.25
3.75±0.25
4.07±0.15
3.01±0.31
3.79±0.31
4.17±0.30
4.11±0.15
5.31±0.15
5.99±0.10
4.51±0.13
5.29±0.23
6.21±0.19
4.61±0.33
5.91±0.13
6.95±0.10
Примечание: *-достоверность различий показателей по отношению к неактивированным нейтрофилам, **-достоверность различий показателей по отношению к НГ, облучёнными с постоянной генерацией импульса, ***- достоверность различий показателей по отношению к НГ, облучёнными с переменной генерацией импульса С учетом поправки Бонферрони критический уровень р составил 0,003. U-критерий Мана- Уитни.
Для изучения секреторной функции нейтрофилов был проанализирован цитокиновый состав (таблица 4), содержание высокомолекулярных пептидов-дефенсинов и бактерицидного протеина BPI (таблица 5), биохимический состав супернатантов нейтрофилов (таблица 6). В результате проведённых исследований нами было выявлено, что нейтрофилы, полученные из периферической крови доноров и инкубированные в термостате в течение 30 мин. при температуре 37ºС в растворе Хенкса выделяют глюкозу, метаболиты азота, ионы кальция, магния, ИЛ-1α, ИЛ-1β, РАИЛ1, ИЛ-8, ФНО-α. Появление этих продуктов в супернатантах неактивированных нейтрофилов обусловлено, возможно, секреторной дегрануляцией клеток, происходящей при инкубации нейтрофилов не в физиологических условиях in vitro. Поэтому термин «неактивированные нейтрофилы» мы можем принимать лишь условно, как выделенные без индуктора секреции клеток, т.е. без лазерного излучения. Уровни изучаемых цитокинов в супернатантах неактивированных нейтрофилов доноров достоверно отличались от содержания в секреторных продуктах, выделенных после активации нейтрофилов лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса. Эти изменения имели однонаправленный характер, степень выраженности которых была различной.
Таблица 4
Содержание цитокинов в супернатантах нейтрофилов неактивированных и активированных лазерным излучением с постоянной и переменной генерацией импульса (М±m)
Цитокины
Супернатанты
неактивированных
нейтрофилов
Параметры излучения
активированные
ЛО с постоянной
активированных
ЛО с переменной
ИЛ-1α, пг/мл
51.42±0.29
59.83±0.54
*, ***
62.43±4.41
ИЛ-1β, пг/мл
14.28±0.12
20.36±0.87
* ,***
24.47±12.21
*, **
РАИЛ-1,пг/мл
99.36±2.42
99.67±1.92
100.98±2.10
*
ИЛ-8, пг/мл
44.48±1.39
69.8±1.88
136.8±21.71
ФНО -α, пг/мл
2.21±0.45
4.24±0.75
6.31±0.33
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9
