2.Спекторофотометрические – (кинетические) - непрерывно или периодически в ходе ферментативной реакции определяют потребление субстракта или кофермента, либо образование продукта.
КДЗ – ферментная диагностика используется для:
- для распознавания наследственных нарушений обмена веществ (первичные наслед.энзимопатии)
- для диагностики и дифференциальной диагностики приобретенных заболеваний (вторичн. приобрет. энзимопатии) – можно выявить особенность протекания болезни почти на молекулярном уровне.
Повышение активности ферментов – за счет выхода фермента из органов или тканей в кровяное русло.
Определение активности аминотрансфераз, клинико-диагностическое значение
Аминотрансферазы – это ферменты, осуществ. процессы межмолекулярного переноса аминогрупп, т.е. трансаминирование (переаминирование) - процесса. Трансаминирование играет ключев. Роль в промежуточном обмене, обеспечивает синтез и разрушение отдельных аминокислот в организме. АСТ и АЛТ.
Методы определения активности аминотрансфераз в сыворотке крови делятся на 2 основные группы:
Колориметрические (конечной точки.)
Кинетические (спекторофотометрические)
КДЗ – для диагностики
инфаркта миокарда АСТ, который не диагносцируется электрокардиографом (кардиограмма)
- (гемолиз Er – не искажает результат);
забол. печени АЛТ (гемолиз Er – искажает результат т.к. в 6 раз превышает содержание внутриклеточно)
(вирусный, токсич. Гепатит), мышечной патологии и др.
В N АСТ –до 31 Е/л
В N АЛТ –до 32 Е/л
Определяется на «Хитачи»
Клинико-диагностическое значение определения активности фосфатаз
Фосфатазы – ферменты отщепляющие остаток фосфорной кислоты от ее органических эфирных соединений.
ЩФ – содержится практически во всех тканях человека, прежде всего в костной тк., паренхиме и стенках желчных протоков печени, канальцев почек, предстательной и молочной железе, клетках слизистой оболочки кишечника, плаценте. Особенно много в растущих костях, желчи и плаценте, в биологических жидкостях тела (мочу, кал, слюну…).
КФ – кислая фосфатаза - фермент – содержится главным образом в предстательной железе, активность её в 1000 раз больше чем в костной ткани, печени, селезенке и почках.
Кинетические (спекторофотометрические) в N ЩФ у муж.0,90 – 2,29; у жен. 0,74 – 2,10; у детей 1,20 – 6,30.
КДЗ – возрастание активности ЩФ – 2 вида патологий: костные заболевания, связан.с пролиферацией остеобластов, и заб. сопровожд. явлениями холестераза (заб.печенит – желтуха, закупорка желчных протоков камнями, спайками,опухолью, лейкимия с разрушением L и выход фермента в кровь)
Снижение активности ЩФ – при замедл. росте детей, при гипотиреозе, авитаминозе С, старч.остеопарозе, при накоплении радиоактивн.в - в в костях.
Повыш.активности КФ –указ на новообразования в предст.железе (в N ЩФ), после операт.вмеш. на предст.жел., биопсия.
Определение активности а - амилазы в сыворотке крови и моче, принцип метода
а - амилаза (диастаза) – фермент - осущ. гидролитическое расщепление полисахаридов (крахмал, гликоген, амилозы и др.продуктов содержащих остатки глюкозы) до декстринов и мальтозы.
Метод определения активности а - амилазы по Каравея (микрометод)
Метод базируется на колориметрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза.
В N в сыворотке крови 16 - 30 г/(ч.л), в моче 28 - 160 г/(ч.л)
Определение активности а – амилазы в биожидкостях энзиматическим методом по конечной точке: интенсивность окраски = активности фермента.
КДЗ: значительное возрастание активности фермента – при заболеваниях поджелудочной железы: о.панкреатит – в сыворотке крови активность а - амилазы повышается и достигает максимума к 12 - 24 ч после развития панкреатита и снижается на 2 - 6 сутки, а в моче может оставаться повышенной до 7 суток. Реже встречаемое или не столь выраженное увеличение - при о.холецистите и др.заб. желчевыводящих путей, перфорации пищевода, язве желудка, при заб. слюнных желез и др.заб.
Клинико-диагностическое значение определения общей активности ЛДГ и её ферментов
ЛДГ (лактатдегидрогеназа) – гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление L - лактата (молочной кислоты) в пируват (пировиноградную кислоту)
В плазме выявлено 5 изоэнзимов ЛДГсостоящих из субединиц:
М (muscie) и H (heart) - 5 изоформ:
ЛДГ – 1 (НННН), ЛДГ – 2 (НННМ), ЛДГ - 3 (ННММ), ЛДГ - 4 (НМММ),
ЛДГ - 5 (ММММ)
ЛДГ - 1 –в основном находится в сердце.
ЛДГ - 5 – в печени.
Методы определения:
кинетические – на оптическом тесте Варбурга в N 174 - 516 Е/л
2.колориметрические – согласно которым определяется количество образовавшегося продукта или потребляемого субстракта после фиксированного инкубационного периода.
КДЗ: - при о.гепатите активность увеличена ЛДГ отмечается в первые недели желтушного периода - (ЛДГ_4, ЛДГ - 5) в первые 10 суток.
У больных инфарктом миокарда повышается активность фермента в первые 8 - 10 часов после начала приступа, максимума к 24 - 36 часам – (ЛДГ - 1, ЛДГ - 2)
Увеличению активности ЛДГ способствует прием алкоголя, некоторых лекарств. препаратов (анаболических стероидов, тестостерона, обезболивающих препаратов, сульфониламида, кодеина,и др.преп.)
Регуляция углеводного обмена, роль углеводов в организме. Определение содержания глюкозы в организме
Углеводы – органические вещества в состав которых входит углерод, водород и кислород.
Роль углеводов:
Энергитическая, пластическая (синтез сложных ферментов, белков, нуклеиновых кислот, входят в состав клеточных мембран, участвуют в построении клеток опорно - двигательного аппарата), защитная (входят в состав слизи, секретируемых желез, способствуют обезвреживанию и выведению токсических веществ), Депонирующая (запас.питательных веществ в печени в виде гликогена – распадается до глюкозы), Специфическая – связаны с белками, определяют специфичность групп крови человека.
Регуляция углеводного обмена: выделяют 3 уровня: нервный, гормональный и тканевый; регулируется ЦНС и эндокринной системой.
ЦНС - > в печень – распад гликогена – глюкозы - >до N уровня глюкозы в крови - > ЦНС - в поджелудочную железу, и из B - клеток островкового аппарата –> инсулин (способств.усвоению глюкозы тканями).
В плазме крови в наибольшем количестве – глюкоза (является ценнейшим питательным в - вом особенно для мозга).
Колориметрические методы делятся на ферментативный и неферментативный (образование окрашенных соединений - ортотолуидиновый метод, прост в исполнении, точен и специфичен - , ручной метод, влечет – канцерогенез). Шире используют энзимные реагенты – глюкозооксидазный
(количество связанного кислорода или образов.перекиси водорода = содержанию глюкозы) и гексогеназный.
Гексокиназный - Ферментативный метод опр.глюкозы (глюкоза под воздействием гексокиназы и АТФ превращ.в глюкозо - 6 - фосфат, который при взаимодействии с окисленным НАД под влиянием Г - 6 - ФДГ преобразуется в глюконат - 6 - фосфат и восстановленный НАД) - позволяет получить результаты за меньший промежуток времени (3мин) с применением спекторофатометра снабженного термостатируемым кюветным отделением, или полу - автоанализатора.
В N в сыворотке 4,2 – 6,1ммоль/л
В N в моче до 0,8 ммоль/л
Полуколичественный и количественный экспресс – определение глюкозы в крови и в моче с использованием методологии «сухой химии» - визуальной или фотометрической оценки исследуемой жидкости.
(Тест полоски)
Клинико-диагностическое значение определения липидов. Методы определения уровня холестерина
Липиды - гр. разных по хим. природе биологич. важных в - в, проявл близкие по физич. и физико - хим. свойствам. Их обьедин. способн. хорошо раствор. в жиров. растворителях и незначительно в воде. Вместе с белками и углеводами сост. основной субстракт мембран клеток.
К липидам относят – жиры (нейтральные) - триглицириды, холестерин (общ.своб.и связ.), фосфолипиды (липиды содерж. обяз.компонент - фосфор), гликолипиды.
Методы определения холестерина – на автоматическом анализаторе «Хитачи» или метод определения общего холестерина (метод Илька) колориметрический метод (длина волны 590 - 630нм(ФЭК),норма Холест. 3.0 - 5.2ммоль/л
- принцип: ХС в присутствии уксусного ангидрида, смеси уксусной и серной кислоты дает зеленое окрашивание, интенсивность которого = содержанию холестерина.
КДЗ:
Гиперхолестеринемия – фактор риска коронарного атеросклероза, ИБС и инфаркта миокарда. Генитические нарушения в обмене ЛП.
Вторичная Гиперхолестеринемия - при забол.печени (обтурационной желтухе), поражениях почек (гломерулонефрит), злокачественных образованиях поджелудочной железы и простаты, подагре, гипертонической бол., эндокринных расстройствах, гипотериозе, сах.диабете, хр.алкоголизме, гликогенозе 1т., ожирении.
Снижение уровня холестерина – гипохолестеринемия – при голодании, при поражении ЦНС, умственной отсталости, гипертиреозе, о.инф.заб., о.панкреатите, и др.заб.
Исследование пигментного обмена. Виды желтух, методы определения билирубина в сыворотке крови
Источниками образования пигментов служат Hb. Er живут 100 - 120 дней. При разрушении в кост.мозге, силезёнки, печени - происходит распад Hb – образуется пигмент зелёного цвета – вертоглобин. ®на железоглобин и глобин®биливердин, под воздействием ферментов® биллирубин (номальная составляющая часть крови) не прямой, свободный.
Далее неконьюгированный биллирубин поступает в печень под действием трансферазы соединяется с глюкороновой кислотой и образует коньюгированный (прямой, связанный) биллирубин – водорастворим, выделяется мочёй, поступает в желочный пузырь ® кишечник, в тонком кишечнике, под влияние флоры восстанавливается до стеркобиллиногена и мезобиллирубиногена, выделяется с калом, окисляется до стеркобиллина; через большой круг кровообращения. Через почки выделяется с мочёй в виде уробиллиногена, окисляясь воздухом превращается в уробелин.
Норма биллирубина 8,6 – 20,5 мкМоль/л
Определение биллирубина в сыворотки крови – метод основан – коньюгированный биллирубин даёт с деазореактивом (сульфаниловая кислота) розовое окрашивание, а не коньюгированный биллирубин даёт окрашивание после добавления кофеина. По интенсивности окрашивания судят о содержании общего билирубина (коньюгированный + неконьюгированный).
Норма общего 11,1 мкмоль/л
Коньюгированный 2,58 мкмоль/л
Неконьюгированный 8,56 мкмоль/л
Методы исследования желудочного содержимого. Клинико-диагностическое значение
Определяется общая кислотность, свободная НСL и связан.
НСL.
в N общ. – 40 - 60 ммоль/л.
Своб.НСL – 20 - 40 ммоль/л.
Связ.НСL - 10 - 20 ммоль/л.
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7
