Посев на стерильность катетеров, резиновых перчаток и др. изделий из резины и пластикатов. Контроль стерильности зондов, катетеров, резиновых перчаток и  других изделий  из  резины  производят  путем  полного  погружения  мелких изделий в питательные среды,  от более  крупных с помощью стерильного пинцета стерильными ножницами  отрезают  небольшие кусочки (1-2 см) и погружают в питательные среды.

Посев на стерильность хирургического шовного материала. Перед посевом  емкость с отобранными образцами шовного материала в  предбокснике протирают стерильной марлевой салфеткой, обильно смоченной 6%  раствором перекиси водорода,  и оставляют на 30 минут. Затем вносят в бокс.

1.  Кетгут. Подготовленный к работе кетгут в операционном блоке хранят  в  спиртовом  растворе  йода. Кетгут перед посевом подвергают специальной обработке для нейтрализации и отмывания нейтрализующего раствора. Моток кетгута, приготовленный для исследования, перекладывают стерильным карнцангом или пинцетом  в  стерильный 10%  раствор гипосульфита натрия.  Раствор гипосульфита натрия готовят на  дистиллированной  воде,  разливают  в  пробирки (колбы) по  20-30  мл,  стерилизуют  текучим  паром  по 30 минут в продолжении 3 дней.  Кетгут выдерживают в растворе гипосульфита в течение 24  часов  при  комнатной температуре (возможно помутнение раствора за счет выпадения серы), затем перекладывают в пробирки с 20-30 мл стерильной дистиллированной воды, где также выдерживают в течение 24 часов при комнатной температуре.  Непосредственно перед посевом оток  кетгута извлекают стерильным пинцетом  и перекладывают в терильную чашку Петри, с помощью пинцета и ножниц его разрезают на мелкие  кусочки длиной 1-2 см и раздергивают для прорастания микроорганизмов кетгута. Посев производят в 2 пробирки с  тиогликолевой средой, 2 пробирки со средой Сабуро  и  2  пробирки  со  средой Хоттингера, помещая в каждую пробирку по 4-5 кусочков исследуемого материала.

2.  Шелк. Подготовленный к работе шелк в операционных хранят в спиртовом растворе,  поэтому перед посевом шелк (лавсан) помещают на 24 часа в стерильную дистиллированную воду при комнатной температуре. Перед посевом моток шелка (лавсана) перекладывают в стерильные чашки Петри,  разрезают  на  мелкие кусочки длиной 1-2 см. Посев шелка производят так же как и кетгута.

Исследование на стерильность аппаратов экстракорпорального кровообращения. Исследование на стерильность аппарата искусственного кровообращения проводит бактериолог и лаборант лечебно-профилактического учреждения в операционной после асептической сборки аппарата.

Контролю подлежат:

       - смыв из аппарата;

       - перфузат до перфузии;

       - кровь после перфузии.

Стерильный физиологический раствор в количестве не менее 250 мл прогоняют через аппарат, подготовленный к операции, отбирают 100 мл  раствора и засевают на питательные среды. Аналогично производят посев перфузата до перфузии и крови после перфузии.

Посев на стерильность перевязочного материала. Бинты, ватные  шарики,  марлевые  салфетки, турунды и т.п. отбирают из разных мест бикса стерильным пинцетом. Мелкие изделия целиком погружают в пробирки с  питательными  средами. От бинтов (внутренних частей) и крупных   марлевых  салфеток с помощью стерильных ножниц  отрезают  кусочки  и  погружают  в  пробирки  с питательными средами. На каждый  вид  перевязочного  материала используют по 2 пробирки каждой среды.

Посев на стерильность хирургического белья. Простерилизованными и фламбированными ножницами (смоченными в спирте и проведенными  через пламя горелки) с помощью  пинцета от хирургического белья  отрезают  небольшие кусочки ткани (завязка, внутренние швы  и  т.п.)  и погружают в пробирки (колбы) с питательными средами, по возможности, не касаясь пробирки (колбы).

4. Правила забора материала на исследование

В соответствии с Приказом Министерства здравоохранения № 535 от 22.04.1985 г. и № 8 от 19.01.1995 г. задачи по совершенствованию и унификации диагностической базы возлагаются прежде всего на лабораторию клинической микробиологии. Поэтому микробиологические аспекты деятельности больничного эпидемиолога на практике сводится к организации и контролю правильного взятия, хранения и транспортировки материала для микробиологического исследования.

Биологический материала микробиологических методов исследования следует брать в максимально стерильных условиях, тщательно соблюдая правила асептики и по возможности избегая контаминации образцов микроорганизмами из окружающей среды.

Образцы для посевов необходимо брать до начала лечения антибактериальными препаратами или в интервалах между приёмом антибиотиков (не менее 12 часов). Отобранный материал должен быть маркирован и как можно быстрее доставлен в микробиологическую лабораторию. При необходимости образцы помещают в транспортную среду. Некоторые образцы требуют хранения при t 37°, другие – при пониженной (холодильнике).

5. В микробиологических исследованиях применяются следующие питательные среды:

1.      Для определение общего микробного числа микроорганизмов используется чаще всего 1% пептонную воду или мясопептонный бульон (МПБ).

2.      Для обнаружение стафилококков используется:

-         молочно-солевой агар: к 1 л мясопептонного бульона добавляют 65 г хлорида натрия и 20 г сухого агар-агар. Разливают по колбам и стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед посевом к расплавленному и охлажденному до 45°С агару добавляют 10% стерильного молока, равномерно смешивают и разливают в чашки Петри.

-        желточно-солевой агар Чистоковича. 100 мл желточной эмульсии (один желток, размешанный в 200 мл изотонического раствора хлорида натрия) вливают в 300 мл расплавленного и охлажденного до 50°С мясопептонного и разливают в стерильные чашки Петри.

-        молочно-желточно-солевой агар. В 1 л дистиллированной воды растворяют при нагревании сухой питательный агар в количестве, указанном на этикетке банки, и 90 г хлорида натрия; разливают в колбы, стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед употреблением в расплавленный и остуженный до 50°С агар добавляют 60мл стерильного молока, один желток (тщательно разбитый стеклянными бусами с 50 мл изотонического раствора хлорида натрия), полимиксин М 300 000 ЕД. Среду перемешивают и разливают в чашки: по 20-25 мл для использование при подращивании стафилококков на мебрананных фильтрах и по 12-15 мл (тонким слоем) для прямого посева.

3.      Для обнаружение бактерий группы кишечных палочек:

-         используется глюкозопептонную воду (ГПС), среда Эйкмана. Концентрированная среда: в 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г хлорида натрия, 50 г глюкоза, нагревают смесь до кипения, фильтруют, устанавливают рН 7,4-7,6, разливают по 10 мл в колбы (емкостью по 100-250 мл) с поплавками и по 1 мл в пробирки с поплавками. В среду можно добавить индикатор Аедреде (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью) или бромтимоловый синий. Разведенную среду глюкозопептонной воды готовят так же, как концентрированную, но количество ингредиенов в 10 раз меньше на 1 л воды. Лактозо-пептонную среду готовят так же как ГПС, с заменой глюкозы на лактозу. Среды стерилизуют при 112°С 12 мин.

-         среду Эндо. Среду готовят из сухого порошка по прописи, указанной на этикетке банки. Состав порошка: сухой мясо-пептонный агар, лактоза, основной фуксин, сульфит натрия. Среду готовят в день ее использования. Горячую среду различают в стерильные чашки Петри и оставляют до застывания на поверхности стола. Хранить чашки со средой можно не более 3 дней в темном месте или в холодильнике.

-         среду Эндо с молоком ( по Г. П. Калине). Среду готовят из сухого порошка, но воды берется меньше: к 90 мл среды добавляют 10 мл стерильного молока, 0,2 мл 10% спиртового раствора основного фуксина, 0,2 мл 5% спиртового раствора розоловой кислоты, тщательно перемешают зоны просветления при выпадении в осадок параказена.

-         желточно-лактозный бульон с бриллиантовым зеленым. К 700 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 10 г лактозы, 200 мл желчи, 13,3 мл 1% водного раствора бриллиантового зеленого и доливают по 5 мл в пробирки с поплавками, стерилизуют при 112°С 12 мин.

-         среду ФКП-1. Среду готовят так же, как желточнолактозный бульон, но только лактозы берут 1 г и добовляют 1 г триптофана.

-         среду Хейфеца. В 1 л воды растворяют при нагревании 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 5 г маннита. Устанавливают рН 7,4-7,6, фильтруют и добавляют 10 мл 5% спиртового раствора розоловой кислоты, 23 мл 0,1% влного раствора метиленового синего. Стерилизуют при 100°С (текучим паром) 20 мин. Зазливают в стерильные пробирки и скашивает со столбиком. Цвет среды краснофиолетовый.

-         среду Кесслера. К 1 л воды добавляют 10 г пептонна, 50 мл желчи, кипятят 20-30 мин, добавляют 2,5 г лактозы, доводят объем до 1 л, устанавливают рН 7,8-8,2 и добавляют 4 мл 1% водного раствора генциального фиолетового. Среди разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при 0,5 атм. 15 мин. Среда фиолетового цвета. Среда применяется при исследовании почвы.

-         лактозный бульон с борной кислотой

4.      Для обнаружение энтерококков используется:

-     щелочно-полимиксиновая среда. Приготавливают три раствора по следущим рециптам