Причины нарушения подвижности сперматозоидов
Снижение числа подвижных сперматозоидов называется астенозооспермия. Существует множество классификаций степени астенозооспермии:
· Если суммарный процент прогрессивно–подвижных сперматозоидов (a + b) составляет менее 50%, то такую астенозооспермию считают слабовыраженной.
· Если это значение меньше 40%, то говорят об умеренной астенозоооспермии.
· И если имеется лишь 30% подвижных сперматозоидов, то тогда говорят о выраженной астенозоооспермии.
Причин, которые в той или иной степени действуют на показатели подвижности, множество. Это могут быть как экзогенные, так и эндогенные факторы. Из экзогенных стоит выделить следующие:
· неблагоприятные факторы внешней среды,
· различные токсические влияния,
· колебания климатических показателей,
· злоупотребление алкоголем,
· курение,
· действие электромагнитного излучения,
· неблагоприятные условия работы.
Из эндогенных факторов в первую очередь стоит отметить различные аномалии строения и функционирования жгутикового аппарата сперматозоидов. Среди них известны генетические нарушения, которые изменяют нормальное строение аксонемы и ферментопатии, что приводит к нарушениям энергетических процессов, происходящих во время движений жгутиков. Часто это клеточные нарушения, например, патология митохондрий.
Кроме того, известно, что хронические воспалительные процессы придаточных половых желез (вызванные как специфической, так и неспецифической урогенитальной инфекцией) оказывают существенное отрицательное влияние на подвижность сперматозоидов. Это обусловлено токсическим влиянием продуктов воспаления, замещением соединительной тканью функционирующей части желез, а также уменьшением секреции в придатке яичка так называемых андроген-зависимых факторов, необходимых для обеспечения механизмов подвижности сперматозоидов. Также не исключен такой фактор, как аутоиммунный процесс, приводящий к нарастанию титра антиспермальных антител.
Оценка жизнеспособности сперматозоидов проводится следующим образом: после разжижения сперма перемешивается пипеткой, далее на предметное стекло помещается капля неразведенного эякулята. На препарат наносится 1% водный раствор эозина.
Лучшим методом окраски считается окраска по Блуму. На предметное стекло рядом с каплей спермы помещают вдвое большую каплю 5% раствора эозина и каплю 10% водного раствора нигрозина, вдвое большую, чем капля эозина. Сначала эякулят смешивают с каплей эозина, выжидают несколько секунд. Далее препарат смешивают с каплей нигрозина и снова выжидают. После чего делается мазок, аналогичный мазку крови. После высушивания приступают к микроскопии.
Препарат накрывается обычным покровным стеклом и через 2 минуты микроскопируется при увеличении 400х (объектив 40х, окуляр 10х). Конденсор микроскопа вначале опускается. Поскольку живые сперматозоиды не окрашиваются, а мертвые окрашиваются в розовый цвет, то достаточно просто их отличить друг от друга. Подчитывается общее число сперматозоидов в поле зрения (желательно не менее 500). Далее конденсор поднимается и ведется подсчет мертвых сперматозоидов. Процентное содержание мертвых сперматозоидов определяется по формуле:
Cмертв. = C розовые/C общие * 100%.
В норме число живых сперматозоидов должно быть более 75%, однако неоднократно наблюдается наступление беременности и при меньших значениях. Повышение числа мертвых сперматозоидов свыше 25% носит название – некрозооспермия. Причины появления мертвых сперматозоидов различны и до конца не выяснены. Возможно, что это связано с патологией придатка яичка.
Иногда используется индекс нормальных подвижных сперматозоидов (ИНПС) определяется по формуле:
ИНПС = V * C * A * B/106,
где V – это объем эякулята,
C – концентрация сперматозоидов,
A – процент сперматозоидов с прогрессивной подвижностью (a +b) и
B – процент морфологически нормальных сперматозоидов.
Если значения индекс нормальных подвижных сперматозоидов больше или равен 6*104, то это говорит о нормальной фертильности.
Оценка морфологии сперматозоидов (сперматограмма) проводится на неокрашенных препаратах, после обездвиживания в счетной камере. Морфологическая структура сперматозоидов является важным критерием диагностического звена, поскольку наряду с подвижностью этот параметр определяет фертильность спермы. Исследование желательно проводить при помощи фазово-контрастного микроскопа. Анализируется тот же препарат, что и для оценки подвижности клеток.
Проводится подсчет общего числа сперматозоидов в 5 больших квадратах камеры. При этом вначале можно определить число сперматозоидов с ненарушенной подвижностью и нормальным морфологическим строением. Затем изучается процент этих сперматозоидов от общего числа. Также для исследования приготавливается окрашенный препарат (мазок). Для этого используют предметные стекла, которые обезжириваются путем обработки 700 спиртом. На высушенное стекло наносится капля эякулята после полного разжижения. Капля разносится по поверхности стекла с помощью другого, краем, под углом в 450. Необходимо этот процесс осуществлять деликатно, что бы не допустить раздавливания препарата. Распределение материала на стекле происходит за счет капиллярных сил.
Микроскопия вначале проводится при малом увеличении. В норме в поле зрения микроскопа должно быть не менее 30 сперматозоидов, равномерно распределенных по стеклу. Окраска препарата выполняется гематоксилин-эозином. Также используется метод окраски по Папаниколау, Шору и Май-Грюнвальду-Гимзе. Исследование наиболее информативно при окраске по Папаниколау.
Мазки микроскопируют при большом увеличении 900х (иммерсионный объектив 90х, окуляр 10х). Процент морфологически нормальных сперматозоидов определяется по формуле:
N/C * 100%,
где C это число всех подсчитанных сперматозоидов,
N – число сперматозоидов с нормальной морфологией.
Общее число аномальных сперматозоидов вычисляется следующим образом:
C – N.
Эта цифра принимается за 100% для подсчета в процентном соотношении сперматозоидов с различной формой аномалии.
Например, для подсчета сперматозоидов с аномалией головки в процентах используется формула:
G/C – N * 100%,
где G – это число сперматозоидов с атипией головки,
C – это число всех подсчитанных сперматозоидов,
Точно таким же образом идет подсчет числа сперматозоидов с патологией шейки и жгутика.
Затем определяется индекс тератозооспермии (количество дефектов, разделенное на общее число аномальных сперматозоидов).
Варианты морфологии сперматозоидов
Морфологически нормальными сперматозоидами считают такие сперматозоиды, которые имеют овальную головку, хорошо различимую акросому и жгутик. Головка может быть заострена.
В мире общепринятым определением нормального сперматозоида является правило Kruger, которое гласит: «нормальный сперматозоид – это такой, который обнаруживается в верхнем отделе цервикального канала женщины через 8 часов после полового акта». Данное утверждение основано на том, что при этой локализации сперматозоида в половых путях женщины уже произошел естественный отбор нормальных форм сперматозоидов из всего пула.
Во время проведения исследования выделяют так называемые патологические формы сперматозоидов, которые могут быть представлены следующими вариантами:
1. С атипичным строением головки.
В свою очередь различают аномалии размеров головки – макроцефалия (большая головка) и микроцефалия (маленькая головка). Могут быть варианты аномалий формы головки (каплевидная, круглая, веретенообразная, грушевидная, аморфная, резко-заостренная). Здесь же могут встречаться сперматозоиды с неправильным строением акросомы (слишком маленькая акросома, занимающая менее 40% площади головки; несимметричная акросома; вакуолизированная акросома). Головка сперматозоида может быть резко вакуолизирована, что также считается аномалией. Нередки сперматозоиды с двумя (и более) головками, а также сперматозоиды, имеющие множество ядер.
2. С атипичной шейкой.
Среди них различают сперматозоиды с утолщенной шейкой. Также аномальными считаются сперматозоиды, у которых угол между головкой и жгутиком менее 1800.
3. Имеющие цитоплазматические капли в области шейки или головки (более половины головки).
4. С атипичным строением жгутика.
Среди них выделяют короткий жгутик. Также могут быть сперматозоиды с изломанной формой жгутика, неравномерной толщины, закрученными жгутиками.
5. Имеющие более одного дефекта (сочетают в себе несколько аномалий одновременно).
По критериям ВОЗ число морфологически нормальных сперматозоидов не должно быть менее 30%. Повышение числа патологических форм носит название тератозооспермия. Абсолютно точные причины тератозооспермии неясны. Возможно, что это связано с наличием вирусных инфекций, ферментопатий, хромосомных нарушений.
Под «круглыми» клетками понимают все клеточные структуры эякулята, кроме сперматозоидов. К ним относятся:
1. Лейкоциты.
2. Макрофаги.
3. Незрелые половые клетки.
4. Эпителиальные клетки.
5. Дегенеративные клеточные формы.
6. Эритроциты (выявляются только при патологиях).
Это исследование выполняется путем микроскопии окрашенных препаратов или же нативных препаратов в счетной камере. Для окраски рекомендуется использовать метод Май-Грюнвальда-Гимзе.
Лейкоциты
При микроскопии эякулята определяют и подсчитывают клетки – лейкоциты. Исследование выполняется при микроскопии нативных и окрашенных препаратов. При этом нейтрофильные лейкоциты выглядят с несколько неровным выраженным контуром. Иногда встречаются комплексы агрегатов лейкоцитов – скопления клеток от нескольких штук до нескольких десятков. Их определение говорит о наличии активного воспалительного процесса придаточных половых желез.
Абсолютное значение рекомендуется подсчитать в камере Горяева (а не в полях зрения). Для этого идет подсчет общего числа нейтрофильных лейкоцитов в пяти больших квадратах. Общая концентрация определяется по следующей формуле:
C = L * 50 000,
где C это концентрация нейтрофилов в 1 мл экулята,
L – число нейтрофилов в 5 больших квадратах.
Клиническое значение лейкоспермии
В норме в эякуляте должно быть не более 1000000 лейкоцитов в 1 мл. Повышение этого числа носит название лейкоспермия. Лейкоспермия является признаком воспалительных процессов, которые могут возникать на любом участке, начиная от места созревания сперматозоидов до всех отделов семявыносящих путей и придаточных половых желез.
Чаще всего лейкоспермия является признаком наличия бактериальных урогенитальных инфекций. Поэтому в таких случаях показано проведение всестороннего бактериологического исследования эякулята, секрета простаты, уретры, мочи. Для этих целей проводят культуральные исследования (бактериологические посевы) и ПЦР-диагностику (в различных модификациях, таких как РНК-NASBA-тест).
В результате воспаления происходит образование активных кислородных радикалов, которые оказывают неблагоприятное влияние на клеточные мембраны сперматозоидов. Также наблюдается снижение их подвижности.
Если при спермограмме была обнаружена лейкоспермия, то рекомендуется провести и вирусологическое исследование, включающее в себя ПЦР- и ИФА-диагностику.
Клиническое значение определения незрелых половых клеток
В норме в эякуляте должно быть не более 4% незрелых половых клеток, причем большую часть занимают сперматиды. Это значение ведется от общего числа клеток экулята. Увеличение числа незрелых половых клеток говорит о том, что происходит блокирование процессов мейоза. Также это может указывать на нарушение спермиогенеза. Причины, которые приводят к этим нарушениям, многогранны и могут быть обусловлены генетикой, мутациями, токсическими влияниями, неблагоприятными экзогенными факторами.
Для более точной оценки процесса сперматогенеза, кроме спермограммы, применяется гистологическое исследование ткани яичка, полученное путем биопсии.
Исследование эритроцитов и других клеточных элементов в эякуляте
При обнаружении эритроцитов в эякуляте при спермограмме следует заподозрить патологический процесс.
Появление эритроцитов в сперме носит название гемоспермия. Она может быть истинной и ложной. При ложной примесь крови появляется в сперме из-за микротравм слизистой уретры или, например, после массажа простаты. При микроскопии они видны в виде нитей или скоплений.
Истинная гемоспермия характеризуется тем, что эритроциты попадают в эякулят в результате заболевания (чаще в зоне семенного бугорка). Это может быть симптомом воспалительных заболеваний предстательной железы, семенного бугорка, семенных пузырьков, а также опухолей этой же локализации. В этих случаях сперма равномерно окрашена кровью. При микроскопии эритроциты расположены диффузно. Однако стоит заметить, что гемоспермия может быть и у здоровых людей после длительного отсутствия половых контактов.
В норме в эякуляте может встречаться небольшое число эпителиальных клеток, которые являются слущенными клетками почек, мочевого пузыря, простаты, уретры. Для их подсчета используются нативные препараты. Большого клинического значения эти клетки не имеют.
Также в эякуляте могут быть обнаружены клетки макрофаги, которые поглощают и фагоцитируют сперматозоиды. Определение этих клеток также не имеет большого клинического значения.
Достаточно редко выявляются гигантские клетки, которые могут быть истинными и ложными (псевдогигантские клетки). Истинные характеризуют воспалительный процесс. Псевдогигантские клетки представляют собой неразделившиеся сперматозоиды.
Окраска по методу Май-Грюнвальду-Гимзе
Технология приготовления препарата, окрашенного данным методом следующая:
1. Полученный мазок на предметном стекле фиксируется метанолом, после чего на него наносится раствор Май-Грюнвальда в течение 3-х минут.
2. Затем добавляется дистиллированная вода (на 1 минуту).
3. Полученный раствор удаляется без использования проточной воды (путем сливания раствора с поверхности стекла).
4. Далее на мазок наносится раствор Гимзе (0,3 мл краски Гимзе, разведенной в 10 мл дистиллированной воды).
5. Препарат промывается в дистиллированной воде.
6. Высушивание при комнатной температуре.
При данной окраске хорошо дифференцируются «круглые» клетки эякулята. Ядра окрашиваются в красно-фиолетовы цвет, цитоплазма – в светло-голубой. Гранулы нейтрофильных лейкоцитов окрашиваются в коричневый цвет, гранулы базофилов – в ярко-синий или фиолетовый. Эритроциты имеют розоватую окраску. У сперматозоидов имеется следующая окраска: акросома – розовая, головка – интенсивноголубая и жгутик – бледно-голубой.
Под агглютинацией сперматозоидов понимают такое явление, как склеивание сперматозоидов между собой. Данный процесс хорошо визуализируется при исследовании нативных и окрашенных препаратов.
Выделяют истинную и ложную (неспецифическую) агглютинацию. Под вторым типом понимают слипание сперматозоидов с эпителиальными клетками, макрофагами, с фрагментами разрушенных клеток или комками слизи.
При истинной же агглютинации происходит прилипание сперматозоидов друг к другу, причем это слипание может быть разным – некоторые сперматозоиды соединяются головками, некоторые хвостами, а некоторые в виде головка-хвост. Причины процесса точно не ясны. Однако, если имеется большое значение, то это может говорить о наличии иммунологических причин бесплодия. Также это встречается при аутоиммунных процессах и хронических воспалениях. Иногда умеренное слипание наблюдается в сперме здоровых, фертильных мужчин.
Существует некие условные критерии для оценки агглютинации сперматозоидов. Результат выдается в количестве плюсов «+»:
1. «+» – небольшие единичные группы слипшихся сперматозоидов (не более 5 в группе).
2. «++» – группы агглютинирующихся сперматозоидов составляют значение 10 – 20 клеток. Группы единичны.
3. «+++» – определяются более 5 групп, склеенных сперматозоидов, причем в группе их число достаточно большое (несколько десятков).
4. «++++» – в этом случае имеются множество полей зрения, занятых слипшимися сперматозоидами.
При микроскопии эякулята нередко определяются неклеточные структуры. К ним относятся:
· лецитиновые зерна,
· кристаллы Беттхера,
· амилоидные тельца,
· слизь.
Лецитиновые зерна представляют собой мелкие образования округлой формы. Имеют белесоватый цвет. В норме их достаточно много. Уменьшение числа лецитиновых зерен свидетельствует о наличии хронического воспалительного процесса в предстательной железе.
Кристаллы Беттхера – бесцветные структуры, имеющие удлиненную форму. При окраске раствором Люголя окрашиваются в синий цвет. По своей сути это продукт кристаллизации секрета предстательной железы. Большое их количество также говорить о наличии хронического простатита.
Амилоидные тельца являются аналогами конкрементов округлой формы. Центр образований может быть мелкозернистым, желтого цвета. Эти образования образуются в случаях длительного отсутствия семяизвержений. Иногда могут быть и при простатите.
В норме в эякуляте отсутствует слизь. При наличии большого числа слизи стоит заподозрить хронический воспалительный процесс в семенных пузырьках и в предстательной железе. Возможно, что наличие слизи может приводить к нарушениям подвижности сперматозоидов из-за того, что вязкая слизь окружает сперматозоиды и затрудняет их движение.
Показатель плодовитости Фарриса
Показатель плодовитости Фарриса определяется по формуле:
I = V * N * M/100,
где V – это объем эякулята, мл; – число сперматозоидов в 1 мл;
M – процент подвижных сперматозоидов.
В норме показатель должен составлять не менее 200.
Все данные спермограммы необходимо индивидуально интерпретировать, т. к. спермограмма не только «зеркало» репродуктивной функции, но и «зеркало» образа жизни.
Исследование эякулята – это одно из самых субъективных лабораторных исследований, а его результат – спермограмма во многом зависит от уровня квалификации спермиолога.
В некоторых организациях для исследования эякулята широко применяют специальные приборы – спермоанализаторы. Но спермограмма, выполненная на аппарате обязательно должна дублироваться исследованием спермиолога, так как аппараты могут «путать» некоторые морфологические структуры между собой. Например, головки сперматозоидов и мелкие лейкоциты.
В заключение следует отметить, что ни один из нормативных показателей эякулята не указывает минимальных значений, при которых возможно наступление беременности.
Список использованных источников
1.Ромашкина К.И. Мужское здоровье и долголетие. М. – 2008 г.
2.Шафеи Р.А. Что такое спермограмма, анализ спермограммы. М. – 2005 г.
3.Печурина И.Н., Еркович А.А. Мужское бесплодие. М. – 2007 г.
4.Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М.: Медицина, 2006. – 544 с.
Страницы: 1, 2, 3
