МЕТОДЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МУМИЁ
МУСУРМАНКУЛОВ Р.Т.
Содержание
Обзор
Микробиологический анализ
радиационный анализ
Микроэлементный анализ
Биохимический анализ
Токсилогический анализ
Исследование канцерогенности
Методы идентификации мумиё
Проблема признания мумиё лекарственным средством и введение его в число разрешенных к применению, включает в себя ряд вопросов, которые так и не смогли решить многочисленные исследования, ведущиеся с 1956 года. По-прежнему нет единой теории происхождения этого препарата народной медицины. Добываемый в разных местах СНГ и перерабатываемый по разным технологиям, конечный продукт различается как по химическому составу, так и по фармакологическому действию. Естественно, что разнообразие свойств от предполагаемого происхождения, места сбора и метода переработки сырца делает невозможным обычную процедуру утверждения нового фармакологического средства, т.к. каждая новая партия препарата должна будет вновь проходить утверждение. Учитывая это, мы предложили [1] упрощенный вариант этой процедуры, включающий в себя комплекс исследований, удостоверяющих в безопасности данного препарата для организма человека. Этот комплекс должен включать следующие обязательные анализы: микробиологический, радиологический, микроэлементный, токсикологический. Поэтому проблема стандартизации мумиё как лекарственного препарата, сводится к решению двух вопросов.
1. Идентификация сырца мумиё по предполагаемому виду происхождения и месту сбора.
2. Идентификация экстракта мумиё по методу переработки и проведенным анализам.
Работ, посвященных проблеме происхождения мумиё в природе, достаточно много, и они подробно описаны в [2]. Что касается мест нахождения, то наибольшее количество работ связано с изучением памирского и тянь-шаньского мумиё [3-16,25,36]. Достаточно много работ по исследованию кавказского мумиё [17-22]. Имеются данные об исследовании забайкальской [23] и саянской [24] разновидности мумиё. Кроме того, в [32] приводятся данные по заграничным видам мумиё: монгольское, индийское, бирманское и непальское. Более подробно эти работы будут освещены при анализе результатов, приведенных в них.
Методы переработки сырца различаются как по применяемой технологии, так и по температурным режимам. В [28] сырец заливали холодной дистиллированной водой (1: 3) и оставляли при комнатной температуре на 2-3 суток, периодически помешивая. После полного растворения примесь удаляли фильтрованием через двухслойную марлю. Полученную жидкость коричневого цвета выпаривали на водяной бане при 60-70 °С и, постоянно помешивая стеклянной палочкой, доводили до образования густой тестовидной массы. Оставшуюся часть влаги удаляли в сушильном шкафу при температуре не выше 60 °С. В [21] куски породы с мумиё обмывались этиловым спиртом, затем несколькими порциями стерильной водопроводной воды, что обеспечивало чистоту препаратов в санитарно-бактериологическом отношении, но не уничтожало собственной микрофлоры мумиё. Полная стерилизация раствора мумиё достигалась при троекратном прогревании его на водяной бане в течение 15 минут при температуре кипения. При этой же температуре проводилась очистка в [16,24]. В [31] образцы сырца обрабатывали 10-кратным количеством дистиллированной воды и оставляли на ночь. Затем декантировали и фильтровали надсадочную жидкость через бумажный фильтр. Остатки порознь многократно обрабатывали водой до появления бесцветной жидкости. Объединенные фильтраты упаривали на водяной бане при температуре не выше 50 °С до густого остатка, после чего образцы досушивали при постоянном переворачивании массы. Также 10-кратным количеством теплой воды (40-50 °С) заливали измельченный сырец в [36], затем после многократного сцеживания и фильтрования извлекатель отгонялся либо в вакуум-выпарном аппарате при 50-55 °С и при разрежении 600-650 мм. рт. ст., либо на низком огне при температуре 70-80 °С. Экстракт досушивали в вакуум-сушильном аппарате или обычном сушильном шкафу до остаточной влаги не более 5%. Низкотемпературная очистка (не выше 40 °С) применялась в [1]. Измельченный сырец заливали родниковой водой (1: 5) и настаивали в течение двух суток. Затем раствор фильтровали через четырехслойную марлю и выливали в емкость из нержавеющей стали. Емкость нагревали до 40 °С, а установленные тепловые вентиляторы ускоряли процесс испарения воды из раствора. После удаления основной части воды оставшуюся полужидкую массу разливали тонким слоем на полиэтилене и досушивали до нужной консистенции. Кроме того, часто используют выпаривание воды из раствора на паровых банях (низкотемпературное), при кипячении раствора, а то и вытапливание мумиё непосредственно из сырца, используя сравнительно низкую температуру плавления мумиё (около 80 °С). По внешнему виду экстракт мумиё представляет собой твердую массу с блестящей поверхностью различной окраски - от желто-коричневой до черной, со специфическим для каждой разновидности запахом и горьким вкусом. При повышении температуры мумиё размягчается, становится вязким, мажущим. На воздухе масса затвердевает и превращается в твердое, хрупкое вещество. Имеет своеобразный запах, горьковатый вкус.
Данные о растворимости в различных жидкостях противоречивы. Все авторы отмечают хорошую растворимость в воде. Однако в отношении органических растворителей картина иная. Так, в [3,16] утверждается, что в бензоле, ацетоне, хлороформе, метиловом и этиловом спиртах мумиё частично растворяется и заметно набухает. Однако в [30] утверждается, что мумиё очень мало растворяется в 95% спирте (1: 4500) и эфире (1: 7000), практически нерастворимо в хлороформе (1: 10000). Подобные результаты получены в [26,27]. В таблице 1 приведены данные о физико-химических характеристиках исследованного мумиё. Как видно из таблицы, результаты исследования характеристик мумиё имеют разброс и не могут служить каким-то четким ориентиром при идентификации мумиё.
Микробиологическая загрязненность мумиё исследовалась во многих работах. В [7] изучали бактериальную форму мумиё и действие этого препарата на некоторые виды микроорганизмов. Всего было исследовано 4 пробы, из которых 3 являлись исходным материалом, четвертая была очищенным препаратом.1-я проба содержала большое количество кала животных, 2-я - масса, покрывающая обломки слоистого камня. Обе пробы были добыты в районе г. Пенджикента.3-я проба, также покрывающая камни, была добыта в горных пещерах у озера Искандер-Куль. В проведенной серии опытов изучалась аэробная и анаэробная микрофлора мумиё. Поверхность вещества предварительно обрабатывалась спиртом и трижды стерильным физиологическим раствором, затем оно растворялось в физиологическом растворе 1: 2 и 1: 4. Разведенное мумиё засевалось на среды Левиной, Плоскирева, Сабуро, 5% кровяной агар, кусочки картофеля, мясопептонный агар и производилось выращивание в течение 10 дней при комнатной температуре в условиях термостата. Из всех проб мумиё выделены одни и те же микроорганизмы: энтерококки, сарцины, спороносные палочки, разжижающие и не разжижающие желатин. Анаэробной микрофлоры в мумиё не оказалось.
В [12] определяли нормальных обитателей в мумиё Зеравшанской разновидности. Проводили 3 серии опытов с поверхностного слоя и 3 серии опытов с глубинной части по 0.3 г материала с одномоментным посевом в нейтральной, кровяной и молочно-солевой агар, на среду Эндо, Плоскирева и Сабуро для выявления аэробных и факультативных микробов. Также производился посев на среду Врублевского, Китт-Тароцци, Вильсон-Блера, агар со столбиком с последующим подогреванием для облигатных анаэробных микробов. Материал после посева ставился в термостат на 24 часа, затем в течение 5 дней проводилось наблюдение при комнатной температуре. Бактериологические исследования показали, что при посеве мумиё из поверхностного слоя при всех трех сериях опытов были выявлены воздушные сапрофитные микроорганизмы: сарцины, микрококки, тетракокки, воздушная споровая палочка и плесень. Посев, произведенный из глубокого слоя мумиё, дал возможность лишь в одном случае выделить воздушную споровую палочку и плесень. Ни в одном случае не были обнаружены патогенные микробы ни в аэробных, ни в анаэробных условиях культивирования.
В [13] микробиологическому исследованию подверглись 3 образца мумиё (матчинское, 2 образца алайского). Мумиё-сырец, обработанный спиртом, промывали стерильным физиологическим раствором, затем делали посев в мясопептонный бульон и ставили в термостат при 37 °С на 24-28 часов. Высевы производились в мясопептонный агар в чашки Петри. Из каждой колонии готовились мазки, которые окрашивались по Граму, и кроме этого, изучались биохимические свойства каждого вида микроба. При определении вида микроба пользовались определителем В.А. Циона. В исследованных образцах получены 7 видов микроорганизмов: Бац. мегатериум, Бац. пабули, Бац. витреус, Бац. мезентерикус, Бац. сублитис, Бац. микоидес, Бац. антракоидес, которые встречаются преимущественно в фекалиях животных и на почве.
Изучение собственной микрофлоры кавказского мумиё [21] показало, что она представлена палочковидными бактериями, актиномицетами, проектиномицетами и грибками. Кроме того, выявлены следующие физиологические группы микроорганизмов: сульфатрецирующие, нитрифицирующие, гнилостные, денитрифицирующие, аэробные и анаэробные фиксаторы азота, бактерии, разлагающие клетчатку в аэробных условиях. Полная стерилизация раствора мумиё достигалась при трехкратном прогревании его на водяной бане в течение 15 минут при температуре кипения.
При решении вопроса о стерильности мумиё в [28] исследовали 10 проб. Из каждой пробы готовили основной раствор из расчета 1 мг на 1 мл фосфатнобуферной смеси (по прописи N 1 ГФ), 10% раствор мумиё в мясо-пептонном бульоне с последующим десятикратным разведением до 0,001%. В первом варианте опытов из основного раствора мумиё делали посев по 1 мл на 2 пробирки, содержащих по 20 мл тиогликолевой среды. Затем из одной пробирки с тиогликолевой средой делали посевы по 0,5 мл на скошенный агар с 0,5% глюкозой, на чашку со средой Сабуро и по 1 мл в 2 пробирки с тиогликолевой средой. Посевы на среде Сабуро и одну из 2 пробирок с тиогликолевой средой вновь выдерживали 5 суток при 22°С. Посевы на остальных средах, в том числе и вторую пробирку первичного посева на тиогликолевой среде, выдерживали 5 суток при температуре 37°С. Учет результатов посевов производили через 10 суток после первичного посева проб мумиё на тиогликолевую среду. Контролем служили пробирки тиогликолевой среды с фосфатно-буферной смесью. В другом варианте опытов различные растворы мумиё от 10% до 0,001% выдерживали в термостате в течение 7 суток. Причем навески мумиё, взятые для приготовления основного 10% раствора, подвергали относительной стерилизации - в течение 4-5 часов выдерживали в 96% спирте и затем обмывали стерильной водой. Ежедневно в течение 7 суток из каждого разведения мумиё после инкубации в термостате делали посевы на мясопептонный щелочной и молочно-солевой агары, среды Плоскирева, Эндо и Сабуро. Следует отметить, что микроорганизмы мумиё хорошо росли на средах Эндо, Сабуро, солевом агаре и не давали роста на среде Плоскирева и щелочном агаре. Результаты обоих вариантов показали, что мумиё нестерильно и содержит в себе микроорганизмы почвы, находящиеся, по видимому, в состоянии анабиоза. Были проведены исследования по идентификации бактерий, согласно схеме, предложенной Г.Я. Кивман. При использовании специальной накопительной среды для выделения патогенных стафилококков удалось обнаружить стафилококк с желтой пигментацией. Однако выделенные культуры стафилококка не давали гемолиза на чашках с 5% взвесью эритроцитов кролика и не коагулировали плазму крови. На основании этих результатов можно отнести выделенные культуры стафилококка к группе сапрофитных бактерий. При посеве на среду Эндо отмечен рост колоний различного цвета, микроорганизмы которых являются одной из разновидностей сапрофитных бактерий, относящихся к роду эшеририй. При посеве на среды Левина и Плоскирева ни в одном случае не обнаружен рост колоний, подозрительных на патогенные бактерии рода шигелл, сальмонелл и протея.
Страницы: 1, 2, 3, 4
