Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования
ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
ЕСТЕСТВЕННО-ГЕОГРАФИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
Кафедра биохимии
Отчет о практике по специализации
МУЗ «Пензенский городской родильный дом №1»
Биохимические показатели крови беременных женщин
Студентка гр. БХ-41 Стексова Н.А.
«____»________________ 2009г.
Руководитель практики от ВУЗа:
________________ Генгин М.Т.
Руководитель практики от организации:
______________ Ирышкова Е.Т.
Пенза, 2009г.
Содержание
1 Общая информация о месте прохождения практики
2 Методы исследования
2.1 Определение глюкозы в крови на анализаторе глюкозы ECO TWENTY
2.2 Определение креатинина в крови на биохимическом анализаторе ROKI
2.3 Определение мочевины в крови на биохимическом анализаторе ROKI
2.4 Определение билирубина в крови на биохимическом анализаторе ROKI
2.5 Определение общего белка в крови
3 Краткий обзор литературы по проблеме: Изменения биохимических показателей крови при беременности
4 Результаты исследований
5 Интерпретация полученных данных
Список литературы
Клинико-диагностическая лаборатория городского родильного дома №1, находящаяся по адресу ул. Пушкина, 56, является структурным подразделением МУЗ «Пензенский городской родильный дом №1», который включает в себя городской родильный дом по адресу ул. Пушкина,56, городской родильный дом по адресу проспект Победы и 3 женских консультации (ул. Красная, ул. 8 Марта, ул. Гагарина).
Клинико-диагностическая лаборатория располагается в изолированном крыле здания родильного дома.
Разделы КДЛ Родильного дома №1:
1. гематологический;
2. цитологический;
3. общеклинический;
4. иммунологический;
5. биохимический.
Клинико-диагностическая лаборатория оснащена необходимой мебелью и медицинским оборудованием:
1. термостат;
2. сухо-жаровой шкаф;
3. холодильники;
4. вытяжной шкаф;
5. рефрактометр;
6. весы торсионные;
7. автоматизированный гематологический анализатор МЕК-6400;
8. полуавтоматический анализатор мочи Aution Eleven;
9. анализатор глюкозы ECO TWENTY;
10. биохимический анализатор ROKI;
11. микроскопы (моно- и бинокулярный).
Основные задачи, решаемые коллективом: определение уровня клинико-биохимических показателей биопроб для оценки здоровья беременных женщин на разных сроках беременности и новорожденных детей.
Из биохимических методов исследования проводятся следующие биохимические тесты:
1. общий белок в сыворотке крови;
2. белковые фракции;
3. протромбиновый индекс в плазме крови;
4. фибриноген в плазме крови;
5. глюкоза в сыворотке крови;
6. мочевина в сыворотке крови;
7. билирубин в сыворотке крови;
8. АЛТ в сыворотке крови;
9. АСТ в сыворотке крови;
10. железо в сыворотке крови;
11. креатинин в сыворотке крови;
12. креатинин в моче;
13. функциональная проба Реберга;
14. амилаза в сыворотке крови;
15. тимоловая проба в сыворотке крови;
16. серомукоид в сыворотке крови;
17. СРБ в сыворотке крови;
18. глюкоза в ликворе;
19. исследование системы гемостаза.
биохимический кровь беременность
Проба: цельная кровь, сыворотка или плазма.
Необходимые принадлежности:
1) буферный раствор – специальный реагент, изготовленный для амперометрических измерений для смешивания с образцами;
2) пробирки Эппендорфа (пластиковые с крышками, 2мл);
3) стандартный раствор (калибратор) глюкозы 12,0ммоль/л;
4) капиллярные трубки на 20мкл для забора крови без пузырьков.
Принцип действия: образец автоматически всасывается в систему датчиков. Глюкоза в крови энзиматически преобразуется при помощи глюкозооксидазы. Количество образовавшегося продукта (перекись водорода) количественно определяется по датчику. После измерения система и датчик автоматически очищаются и подготавливаются для следующего измерения.
Ход определения:
1) включить в сеть (5-10мин приведение в готовность);
2) на сенсорном экране появляется меню;
3) произвести необходимые настройки меню, нажать «Start»;
4) обработка каждого образца и выдача чеков с результатами идет автоматически.
Подготовка образцов:
1) кровь взять с помощью специальных капилляров (20 мкл);
2) смешать в пробирке с реактивом (1000мкл), перемешать, не встряхивать сильно, чтобы не образовалась пена (иначе кровь гемолизируется);
3) пробирки загрузить в лоток (сначала стандарт, затем опытные образцы).
В пробирке 20мкл крови и 1000мкл реагента.
Автоматическая калибровка каждые 30 мин. Ошибки при измерениях до 1,5%. Анализатор останавливается автоматически, если калибровка не принимается или контрольные образцы выходят за установленные пределы.
Принцип метода: скорость образования окрашенного комплекса креатинина с пикриновой кислотой в щелочной среде пропорциональна концентрации креатинина в пробе.
Исследуемый материал: сыворотка или плазма крови. Гемолизированная сыворотка или плазма крови для анализа не пригодна.
Состав набора:
Реагент №1. Пикриновая кислота (100 мл).
Реагент №2. Натрий едкий (100мл).
Калибратор – раствор креатинина 17,7ммоль/л (2мл).
Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:
Рабочий реагент: для исследования смешайте реагенты №1 и №2 в соотношении 1:1. нагрейте рабочий реагент до температуры 370С.
Рабочий раствор калибратора: для исследования разведите калибратор в 100 раз дистиллированной водой. Полученная концентрация 177мкмоль/л. Процедура анализа:
Анализ проводится в термостатируемой (370С) фотометрической кювете с длиной оптического пути 1см при 505нм против воздуха. В кювете смешайте рабочий реагент и исследуемый материал или калибратор в соотношении 5:1 (например, 1мл рабочего реагента и 0,2мл исследуемого материала). Через 1 минуту измерьте оптическую плотность (Е1). Повторите измерение точно через 60сек (Е2). Вычислите величину ΔЕ=Е2 – Е1.
Расчет концентрации креатинина (С):
В сыворотке (плазме)
;
ΔЕпробы – изменение оптической плотности исследуемой пробы,
ΔЕкалибр – изменение оптической плотности калибровочной пробы,
177мкмоль/л – концентрация креатинина в разведенном калибраторе,
Если концентрация креатинина превышает 880мкмоль/л в сыворотке (плазме) разведите исследуемые образцы в 5 раз физиологическим раствором и повторите определение; результат умножьте на 5.
2.3 Определение мочевины в крови на
биохимическом анализаторе ROKI
Принцип метода: метод основан на оптическом тесте Варбурга с использованием сопряженных ферментативных реакций, приводящих к образованию в инкубационной среде НАД:
Мочевина + Н2О← уреаза → 2NH3 + CO2;
NH3 + α-кетоглутарат + НАДН2 ← глутаматдегидрогеназа → L-глутамат + НАД + Н2О.
Скорость окисления НАДН2 в НАД пропорциональна концентрации мочевины в пробе.
Исследуемый материал: негемолизированная сыворотка или плазма крови.
Реагент №1: 0,05М трис-буфер, рН 8,0 (60мл).
Реагент №2: Стабилизированный раствор фермента: уреаза – 8000Ед/л, глутаматдегидрогеназа – 700Ед/л (20мл).
Реагент №3: Стартовый реагент: НАДН2 – 160мг/л (20мл).
Калибратор: Раствор мочевины – 13,3ммоль/л (800мг/л).
Процедура анализа:
I. Анализ с использованием исследуемого образца в качестве стартового реагента. Рабочий реагент: смешайте реагенты №1,2,3 в соотношении 3:1:1. В кювете фотометра с длиной оптического пути 1см смешайте рабочий реагент и исследуемый образец (или калибратор) в соотношении 100:1 и через 1мин измерьте величину экстинкции при 340нм против воды (Е1). Точно через 60сек повторите измерение (Е2). ΔЕ=Е1 – Е2.
II. Анализ с использованием НАДН2 в качестве стартового реагента. Рабочий реагент: смешайте реагенты №1 и 2 в соотношении 3:1. В кювете фотометра (1см) смешайте рабочий реагент и исследуемый образец (или калибратор) в соотношении 80:1. Через 1мин добавьте реагент №3 в объеме, равном ¼ взятого объема рабочего реагента, перемешайте и через 1мин измерьте величину экстинкции при 340нм против воды (Е1). Точно через 60сек повторите измерение (Е2). ΔЕ=Е1-Е2.
Расчет концентрации (С) мочевины в исследуемом образце:
Сыворотка:
или
.
Принцип метода: прямой (связанный, конъюгированный с глюкуроновой кислотой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а общий билирубин – в присутствии кофеинового реагента с образованием окрашенного азосоединения. Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна концентрации билирубина и измеряется фотометрически при длине волны 535нм (500-560нм).
Исследуемый материал: сыворотка крови без следов гемолиза. Пробы стабильны 2 часа при комнатной температуре в защищенном от света месте.
Реагент №1: Кофеиновый реагент (200мл).
Реагент №2: Сульфаниловая кислота (55мл).
Реагент №3: Натрия нитрит (2мл).
Реагент №4: Физиологический раствор (250мл).
Калибратор: 85,5мкмоль/л (в 2мл дистиллированной воды).
Страницы: 1, 2
